พืช C₄ มีการตรึง  2 ครั้ง โดย

                   ครั้งแรกเกิดขึ้นในเซลล์มีโซฟิลล์(mesophyll) โดยกรดฟอสโฟอีนอลไพรูวิก ( phosphoenolpyruvic  acid หรือ PEP )

ซึ่งเป็นสารที่มีคาร์บอน(C) 3 อะตอม ตรึง  CO₂ ในบรรยากาศ โดยมีเอนไซม์ PEP carboxylase เป็นคะตะลิสต์ ได้สารที่มี C 4 อะตอม

เรียกว่ากรดออกซาโลแอซิติก(oxaloacetic  acid  หรือ  OAA) ซึ่งเป็นสารประกอบคงตัวชนิดแรกที่ได้จากการตรึง CO₂  จึงเรียกว่าพืช  C₄

จากนั้น OAA จะเปลี่ยนเป็นกรดมาลิก( malic  acid) และลำเลียงเข้าสู่บันเดิลชีทเซลล์

                 ครั้งที่สอง เกิดขึ้นภายใน บันเดิลชีทเซลล์  โดยกรดมาลิกจะปล่อย  C ในรูป CO₂ ให้กับ  RuBP เพื่อเข้าสู่วัฎจักรคัลวินต่อไป  

กรดมาลิกจึงกลายเป็นกรดไพรูวิค(pyruvic acid) ซึ่งมี  C  3 อะตอม แล้วจะลำเลียงกลับมาที่สโตรมา( stroma ) ของเซลล์มีโซฟิลล์ และเปลี่ยนแปลง

เป็นสาร PEP เพื่อจะตรึง  CO₂ อีกครั้งหนึ่ง